描述:Tofacitinib citrate是 JAK1/2/3 抑制剂,IC50 分别为1,20 和 112 nM
相关类别:
信号通路 >> 表观遗传学 >> JAK
信号通路 >> JAK/STAT信号通路 >> JAK
信号通路 >> 干细胞及 Wnt 通路 >> JAK
研究领域 >> 炎症/免疫
靶点:
JAK3:1 nM (IC50)
JAK2:20 nM (IC50)
JAK1:112 nM (IC50)
Rock-II:3400 nM (IC50)
Lck:3870 nM (IC50)
体外研究:Tofacitinib(CP-690550)柠檬酸盐可能在JAK3和JAK2处结合为2.2nM和5nM(Kd)。该报告包括在Camk1(Kd为5,000 nM),DCamkL3(Kd为4.5 nM),Mst2(Kd为4,300 nM),Pkn1(Kd为200 nM),Rps6ka2(Kin.Dom.2-C-)的Tofacitinib的额外结合。末端)(Kd为1,400 nM),Rps6ka6(Kin.Dom.2-C-末端)(Kd为1,200 nM),Snark(Kd为420 nM),Tnk1(Kd为640 nM)和Tyk2(Kd为620 nM) )[1]。将K562,KCL22和THP-1细胞暴露于不同剂量的伊马替尼(IMA)或JAK抑制剂72小时以量化酪氨酸激酶抑制剂(TKI)活性的作用。然后使用MTT测定评估细胞生长抑制。 IMA以浓度依赖性方式抑制K562和KCL22细胞而非THP-1细胞的增殖。 K562的IMA的IC50值为0.28μM,KCL22的IC50值为0.17μM。尽管单独用托法替尼(TOF)或Ruxolitinib(RUX)治疗不能抑制细胞增殖,但Tofacitinib和Ruxolitinib均使K562和KCL22对IMA更敏感
体内研究:与PEG处理的对照小鼠相比,用Tofacitinib处理的动物显示出显着更低的抗药物抗体(ADA)产生(初次免疫后5周,p <0.01,n = 8)。此外,ADA在第28天最早可检测到。与第21天至第35天相比,SS1P的滴度相差1000至200倍。与SS1P相比,注射了匙孔血蓝蛋白(KLH)的小鼠产生更快的抗体反应。然而,与对照相比,Tofacitinib的施用降低了抗KLH滴度(第21天p <0.05,第28天p <0.01,n = 5)。从第21天到第28天,滴度的降低分别为5000到250倍[2]。基于之前的剂量反应研究,选择每日剂量为6.2 mg / kg的托法替尼,以提供80%的后爪体积抑制和能够抑制JAK1和JAK3信号通路> 4小时的血浆暴露
激酶实验:通过与专有标签融合的所选激酶的竞争结合测定记录激酶活性。在存在和不存在测试化合物(例如,托法替尼)的情况下,激酶量与固定的活性位点定向配体结合的测量提供了对配体结合的DMSO对照的%。选择0到10之间的活动用于Kd测定。树形图表示由名为PhyloChem [1]的内部可视化工具生成
细胞实验:使用MTT进行细胞存活测定。简而言之,将K562,KCL22和THP-1细胞(1×10 5个细胞/孔)接种到96孔微孔板上,并用或不用IMA(0.06-1.0μM)和/或托法替尼(10-1,000nM)或RUX处理。 (10-1,000nM)在37℃,湿润的5%(v / v)CO 2气氛中72小时。然后将培养基(200μL)与10μL的5mg / ml MTT溶液在37℃下孵育4小时。在352g离心5分钟后,除去培养基,向各孔中加入100μLDMSO以溶解甲..使用酶标仪在570nm处测量吸光度。结果表示为百分比
动物实验:小鼠[2]使用雌性BALB / c小鼠(6-8周龄)。小鼠通过渗透泵输注(0.25μL/小时,28天)接受PEG300(100mg / mL)或单独载体(PEG300)中的Tofacitinib。免疫前4天,将小鼠其背部表面剃毛。在背部做一厘米的切口以形成皮下袋并插入泵。切口部位用伤口夹闭合。从第0天开始每周(ip)注射小鼠SS1P重组免疫毒素(RIT;5μg/小鼠);对照小鼠仅接受盐水注射。在SS1P或载体免疫前每周,抽取50μL血液以获得血清样品。将血清储存在-80℃直至分析。大鼠[3]在雌性Lewis大鼠中诱导佐剂诱导的关节炎(AIA)。根据后爪体积随机分配大鼠并将其分配给Tofacitinib或载体治疗方案。每个治疗组7-8只大鼠组和正常幼稚大鼠(每组n = 4)在开始治疗后4小时,4天或7天安乐死(分别在免疫后第16,20和23天) 。每天一次口服给予载体或托法替尼(6.2mg / kg),在免疫后第16天开始并持续至第23天。在治疗开始后第4天和第7天(分别在免疫后第20天和第23天)重新评估爪体积。 )。对于微型计算机断层扫描(微CT)成像,以及爪组织中的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,在单独的Lewis大鼠队列中诱导AIA
分子式:C22H28N6O8
分子量:504.493
精确质量:504.196869
PSA:221.04000
LogP:0.23418
储存条件:室温