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V8蛋白酶
Cat.No.:66676-43-5
EC:3.4.21.19
全名: 序列分析纯V8蛋白酶;金黄色葡萄球菌V8蛋白酶
别名: V8蛋白酶;谷氨酰胺内切酶;天冬酰胺内切酶
储存条件:冻干粉,2-8℃
来源:基因工程生产,大肠杆菌表达。
1.产品简介
V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族,能特异水解谷氨酸或天冬氨酸残基羧基侧肽键。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键,在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键,且对Glu的水解速率高于Asp。V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性,**适pH为8.0-8.5。在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时,可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸(DFP)、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)。
2.产品特性
来源 |
重组大肠杆菌 |
产品外观 |
白色、类白色、类黄色粉末 |
比活 |
≥ 5.0 AU /mg pro. |
蛋白电泳 |
单一主条带 |
分子量 |
24.0±2.4 kDa |
单位定义:在25℃,pH7.8的条件下,每分钟催化底物(Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide)生成1μmol对硝基苯胺(4-nitroaniline)所需要的酶量为一个酶活性单位。
比活性:25°C时,以Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide为底物测得的活性约为20 U/mg pro.(对应于37°C时,以酪蛋白为底物的活性约为500 U/mg pro)。
3.储存和运输稳定性
储存稳定性:重组V8蛋白酶冻干粉存于2-8℃,24个月稳定;
溶解后稳定性:用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于-20℃ 以下(1mg/ml),6个月稳定;
用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于4℃(1mg/ml,无菌),2个月稳定;
用50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于25℃或37℃(0.5mg/ml)12h,活性可维持85%以上;
溶解后溶液可反复冻融10次无活性损失。
运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。
4.推荐使用方法
1)使用前注意
可按使用量分装以限度避免污染或自切。
2)目的蛋白溶解
用酶切buffer溶解目的蛋白,例如25-50mM NH4HCO3 pH7.8,若溶解度不好对目的蛋白变性,添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。
3)酶切
V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100(W/W),25℃或37℃酶切2-18h。
表一:V8蛋白酶在含有不同浓度变性剂,尿素25℃2h,SDS25℃12h的稳定性
(注:V8蛋白酶0.5mg/ml,50mM Tris-HCl pH8.0)
变性剂 |
浓度 |
残余酶活 |
不添加 |
0 |
100% |
尿素 |
2M |
95% |
5M |
12% |
|
8M |
0 |
|
SDS |
0.1% |
90% |
0.5% |
80% |
|
1% |
50% |
100 μl胰岛素溶液+198 μl 0.4 M Tris-HCl pH8.0+60 μl 0.1%V8蛋白酶液+超纯水补至400 μl。37 ℃水浴反应2 h,加6 μl磷酸溶液终止反应,C18柱分析:
A:酶切之前 B:酶切之后
5.产品优势
6.相关产品
重组肠激酶;
序列分析纯羧肽酶B;
序列分析纯胰蛋白酶;
序列分析纯糜蛋白酶。