G-418 遗传霉素硫酸盐

是一种氨基糖苷类抗生素,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。通过抑制转座子Tn601,Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素。当neo基因被整合进真核细胞DNA后,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。

生物活性

G-418 disulfate 是与 gentamicin B1 的结构相似的氨基糖苷类抗生素，在原核和真核细胞的蛋白质合成过程中，能够阻止蛋白质的延伸阶段，从而抑制蛋白质的合成[1-3]。

In Vitro

G418是许多原核和真核生物的抑制剂，浓度为1-300微克/毫升。由编码氨基糖苷类3'-磷酸转移酶的Tn5的neo基因对G418的抗性，APT 3'II通常用于实验室研究以选择基因工程细胞[1]。通常，对于细菌和藻类，使用5mg/L或更低的浓度，对于哺乳动物细胞，使用约400mg/L的浓度进行选择，使用200mg/L进行维持。抗性克隆的选择可能需要1到3周[2]。

In Vivo

连续三天G418(40和80 mg/kg)足以消除感染小鼠中所有未转染的布氏疱疹病毒寄生虫[3]。

动物实验

为了表征锥虫群体对G418体内的敏感性，布氏布鲁氏菌GUTat 3.1和布氏布鲁氏菌GUTat 3.1/BBR3的血流形式在亚致死辐射的小鼠中分别扩增。在寄生虫血症的第一个峰之前，收集锥虫，并将含有106个锥虫的等分试样腹膜内接种到小鼠中。感染后24小时，将小鼠分成组，并通过腹膜内接种0.2mL药物，以10，20，30，40，50或80mg/kg体重(bw)的剂量用G418处理。在无菌水中。在第一次治疗后24和48小时，以与之前相同的剂量向每组动物施用G418，导致每只小鼠进行三次处理。需要重复药物治疗以确保从小鼠中完全消除未转染的GUTat 3.1寄生虫。然后通过显微镜检查湿血膜每天监测小鼠33天，以检测寄生虫的存在。记录发现寄生虫的动物，然后从实验中取出。