9401 生物制品方法验证新升级：六大核心变化需关注！

引言：

2025药典正式实施后，药典委又新发布了《9401 生物制品体外生物活性/效价测定方法验证指导原则公示稿》，本文对核心变化进行了归纳解析，供同行借鉴参考。

核心变化一：修订适用范围

征求意见稿明确指出：本指导原则仅适用于“体外生物活性/效价测定方法”，意味着本指导原则将不再适用于“体内生物活性/效价测定方法”。

可能部分读者会产生这样的疑惑：怎么指导原则越升级，适用范围反而更窄了呢？因为基于统计学的方法验证，对分析方法变异的可控性有更高的要求，然而，体内测定法的变异来源多，可控性差，用本指导原则的“标准”要求体内测定法，并不合理。同时，适用范围的修订正符合中国药典更新的底层逻辑，即：持续推进先进理化分析方法在生物制品质量控制的应用，加快推进体外生物学活性检测方法替代动物体内检测法。比如，2025药典新增了“体外热原检查法（报告基因法）”作为“传统热原法（细菌内毒素）”的补充，具有检测热原谱广，灵敏度高，操作简单快速的优点。

为与新的适用范围相适应，本指导原则同步作出下列调整：①将名称“生物制品生物活性/效价测定方法验证指导原则”修订为“生物制品体外生物活性/效价测定方法验证指导原则”；②删除原体内方法的实例，新增一个体外法验证的实例。

核心变化二：引入分析方法生命周期理念

目前，有许多企业仍将“分析方法验证”视为应付申报的打卡任务，仅追求验证通过，将验证视为一次性行为。此次征求意见稿首次引入“分析方法生命周期理念”，是对ICH Q14的转化落实，旨在对分析方法生命周期的全环节进行控制，包括“分析方法开发+验证+监控及再验证”。

①方法开发阶段

以ATP（分析目标概况）作为方法开发的基础，也就是说，在方法建立之初，就应该明确方法的预期目标，包括验证指标及其可接受标准。

②方法验证阶段

验证分析方法是否符合ATP。

③监控及再验证阶段

在日常使用期间，需持续监测已验证的分析方法，以确保分析方法性能在整个生命周期内始终满足预期要求。系统适用性试验可用于分析方法性能的日常检查，例如：①通过系统适用性试验的检测条件被认为具备通过验证时的性能，可在样品运行前用于诊断系统，减少OOS的发生；②采用统计过程控制图对适宜的系统适用性参数进行持续监控，以识别分析方法早期的波动或漂移，若观察到任何变化趋势，即应对产生该趋势变化的原因进行调查，如有必要，及时纠正，以消除潜在的风险因素。

当分析方法在其生命周期内发生变更时，应当基于科学的角度和风险评估的原则来评估分析方法是否需要进行再验证。也就是说：再验证的程度取决于分析方法性能特征受变更影响的程度。例如：若变更后仍在分析方法的耐用性空间内，则不必执行一次完整的验证，通过系统适用性确认即可；若变更了分析方法的关键因素，则需进行全面的再验证；若变更仅对某些性能指标可能产生影响，则针对这些指标进行部分验证。

核心变化三：引入风险评估理念和风险量化的统计学工具

征求意见稿明确提出“需视具体情况拟订相应的验证指标和可接受标准”，也就是说，验证策略应基于风险评估制定。为此，征求意见稿新增了基于控制超出质量标准（OOS）发生率设定相对准确度和精密度的可接受标准的统计工具，将风险量化，用客观数据指导可接受标准的制定。

核心变化四：新增样本量计算公式

统计结果的可靠性与样本量的大小密切相关，适宜的样本量能够确保正确判定验证指标的评估结果是否符合可接受标准。此次征求意见稿新增了样本量的计算公式，可辅助药企人员科学地确认实验所需样本量。

核心变化五：完善验证策略

征求意见稿进一步完善了验证策略并补充验证指标，详见下表： 

核心变化六：新增验证研究结果的应用内容

征求意见稿新增了验证研究结果的应用内容，具体包括：

①利用验证研究的精密度结果确定日常检测中报告值的重复策略：企业可依据报告值的变异情况，科学地调整“出具报告值所需的独立测定次数及每次独立测定所包含的重复数”，而非依赖经验主观判断。

②为样品稳定性研究设定效价变化判定的临界值：确认重复策略后，计算该重复策略下指示效价发生变化的倍数差异临界值，可取该值作为稳定性研究效价变化判定的临界值，当处理前后样品的相对效价报告值的比值大于临界值时，可认为样品效价发生了变化，而非测定方法误差导致的测定结果差异。

参考文献：

【1】  中国药典2025年版9401

【2】  《9401 生物制品体外生物活性/效价测定方法验证指导原则公示稿》